有关慢病毒感染后对细胞的鉴定

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我有几个问题想请教大家2 O9 G' L# z( g
1）lentivirus感染细胞，整合的序列是哪部分？是从目的基因载体的LTR到LTR？还是也包含包装质粒部分呢？
) C+ j% f* {" O9 l$ V# y2）为什么可以提取被感染细胞的基因组来检测病毒整合情况？是因为目的基因直接整合，不存在内含子的问题么？
; ~! f8 ^2 K- V3）有的人用RT-PCR来做，是为什么呢？如果提取基因组就可以检测的话。5 K7 R7 ]; l) y4 P/ {0 Y
4）还有一个问题，如果我提取基因组，我的引物可不可以上游是载体序列，下游是基因序列？+ u$ X/ u8 H! J  P/ G8 Q  E) q
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多谢！
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zmfang555

1.lentivirus 其表达载体5'LTR到3‘LTR的序列整合到宿主基因组中成为前病毒基因组，并不含有辅助包装的遗传物质，否则就成了野生型病毒。
* s* [2 y% Y8 u  H0 V3 ]- B2 f2.提取基因组的目的是为了做定性检测病毒基因组是否整合。6 v0 n/ \, \9 j( k7 g5 `" a! k
3.realtime 的目的是检测目的基因在宿主中的表达水平。, H* \% T* b6 Z7 c
4.引物设计时你要充分考虑你的引物特异性，既目的基因中选取的片段是否有非特异性结合。