细胞制备操作SOP

guanjun1314

哪位大神有“细胞制备操作SOP”相关的资料提供参考不？叩谢！

细胞海洋

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1 _# x4 c, O- \/ h
* u: C3 O) s2 n6 U' @9 g参与讨论 获得积分

gyjjsw11333

为什么下载不了呢

xiaoxiaodeji

制备的sop根据实际操作流程规范化细化就好了，问一下，各位有没有实验室规范管理的相关文件

海南小石

  A- |3 ^! n2 i/ a' ^5 Y- Q' X1 p: j# M- C7 i1 A
有一个相关的，希望对你有帮助: \* O/ c  a( {4 t
一、目的
# E! m) N+ O3 w. y
# T* k8 H7 C& w* PMDCK细胞培养是分离流感病毒及相关研究实验的基本技术。疾控中心的所有技术人员，必须按照本文件相关的操作规程进行操作。2 S% T+ A" \; u  W
; O' K. f% e4 w  G% ?7 `( @
二、适用范围9 l# u9 B8 ?( U) c$ V$ A  K& f  p
' l. Z1 c$ F/ w5 \0 f$ p
适用于疾控中心所有技术人员 。
) ]0 U6 S! p& R; N# R; ~! z1 W  v. S3 k' T
三、程序
: `% K8 M; m' _7 V7 K
3 a- U8 a  S& l5 w: F（一）生物安全要求
& G# K0 U: z9 ^
0 m  J" P2 C) Q; J" r6 I* D实验室生物安全级别：BSL-1
0 l. C/ R, o" @3 N; y$ D. I3 R
4 H* Z# `( Q  p- o" Q2 s所有操作必须在BSL-1实验室的生物安全柜里进行。1 @' w! Q  {2 J1 k& f0 h7 q
3 ^9 A4 [" w, U' M9 p
（二）材料
1 a- F; x: R- y/ N& w7 Y3 k. L
& M9 P% A( u8 W: `1 }7 b1. 生长成片的MDCK细胞# H4 L2 ^7 s3 S$ X% E4 E) K1 t
' N- _) S, E! d! A+ y6 e% X) s  o
2. 无菌的T25细胞培养瓶
) Z7 f$ M$ `3 a6 E9 e- c" s$ k
' f* \7 H/ A4 v' _6 z& M3. D-MEM培养液（含有L-谷氨酰胺）
, E0 W, E. ?" ~2 R3 F. \% O8 ?/ }: {- P- P6 }  U
4. 青、链霉素母液（10000 U/mL青霉素G；10000µg/mL硫酸链霉素），分装后保存于-20℃
/ s+ I6 g+ |+ w
, L! o# p! S; j0 Z* z6 f. A! K% X5. HEPES缓冲液，1M母液1 G- L+ z  C( J6 m* ~4 d- K
# Y! N& v- D6 O& L1 P/ n
6. 胎牛血清
1 F3 G/ ?3 V) G9 ?4 U( a6 I# @6 t; @. X$ p/ J- s: G
7. EDTA-胰酶（0.05%胰酶，0.53mM EDTA-4Na），分装后保存于-20℃
) u" v! I1 [6 c& G) |6 w" v1 t6 A  k! N2 x5 j
8. 7.5%牛血清白蛋白组分V
" K# V, i% N: m4 c; A" v8 o- [/ h1 C/ N$ \# }" |8 X! D1 o! V: J
9. 1mL、10mL无菌移液管
6 f5 q: @6 b+ y/ F- U: F
) |* K+ h/ e' G+ ^1 K" F10. 70％～75％的酒精3 j' d0 E+ ?, y  r" c! g: w
8 }+ E% s2 u: Z7 o( D5 M' T. ~
注意事项：经常检查试剂使用的有效期。
+ |0 B3 ]4 B9 k3 u; E" ?9 ]0 F9 \2 E+ v4 Y) C7 F8 V5 V  D
（三）实验步骤  t/ x& l2 o( o2 _
; B, @/ b* _  e' r/ z
这里以T75细胞瓶的单层细胞培养为例，叙述MDCK细胞的培养程序。如果细胞瓶的规格有变，MDCK细胞悬液的量必须做相应的调整。
" S3 K1 y. E. x5 W9 W0 J/ g1 l+ C( \
1. D-MEM培养液的准备! F5 r& j5 J" X0 B

  T; j5 W9 S8 f# B5 i500mL D-MEM液中加入：
$ B) G0 t3 ]! o) f' t4 y+ Z, b
  |; `4 r+ d2 Z8 p青、链霉素母液5mL（终浓度达：100U/mL青霉素；100µg/mL链霉素），
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HEPES缓冲液12.5mL（终浓度：25mM）。
& e! A0 n$ Q& [+ }, N4 S, s3 r8 S# k! R2 ?0 `3 R
7.5%牛血清白蛋白组分Ⅴ 12.5mL & R+ B/ I& k3 k! o: L

' @; `- N2 i7 {6 F  a1 t+ [2. 细胞生长液的准备
4 y6 N  b) b6 ]/ z4 {! L% |
4 G7 l4 x3 o. B胎牛血清10mL加到90mL的上述（1）的液体中，使胎牛血清的终浓度为10%。
. E! \7 O3 I7 _( m! R0 o/ ^) U0 C1 _( N) |) N( p
3. 首先将细胞培养瓶中的培养液弃去，加入5mL在37℃水浴中预热的EDTA-胰酶。, a  o) b" ]8 D! x

) w+ t3 R. U) ?& d  t1 e4. 温和地摇动细胞瓶1min，使EDTA-胰酶均匀分布在整个细胞薄层。然后用移液管吸去EDTA胰酶。8 b$ |/ @' z' |1 Q; X
# c4 A# |  _8 @& z0 x% F
5. 重新加入5mL在37℃水浴中预热的EDTA-胰酶重复上述步骤。
, {1 I  u7 t$ a' H' ], Z( C. \; v! ?
+ v8 s8 J5 ?) P2 M3 O* e6. 加入1mLEDTA-胰酶使其均匀分布在整个细胞薄层，37℃孵育细胞瓶直至细胞从塑料细胞瓶的表面分离（约5～10min）。必要时可以摇动或吹打来分离细胞。然后加入1mL胎牛血清灭活残余的胰酶。; K0 _  J0 k5 Y) |
# o+ F& b+ G2 j" I& g- c
7. 加9mL已经配置好的含有L-谷氨酸的D-MEM培养液，轻轻用移动移液管来吹散细胞团。
! }% d9 ^+ ^& l: g: K* ]
5 i$ t9 p7 l* _  B9 K& m8. 取10mL混合物加到90mL细胞生长液（细胞悬液的浓度大约为每毫升含105细胞）% t! A1 m) l4 |6 j* x$ U  Q7 S
+ p4 B. e, B( H& `3 s
9. 每个T25细胞培养瓶加入6mL（6×105/mL）细胞悬液，剩余的细胞悬液可以加到T75细胞瓶用于细胞传代。通常6mL细胞悬液2～3日可生长成片（80％～90％）的单层细胞。5 [% l  x7 a! r" l( N. E0 Y0 [

$ s( j/ [1 c- x7 `) W+ f/ B10. 于37℃，5%CO2培养箱里培养细胞，每天观察细胞状态，以供进一步实验用。
& z( y: s, ^) C( w3 a' s6 e+ H3 `

guanjun1314

回复 plum 的帖子
$ A" s7 L  M# o' n. |: S* k- X# Y% J* B/ t' i9 c
非常感谢

guanjun1314

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7 z' f. l9 e8 z( @9 U% W: m" I. a
- |! v; R3 ~" c% L9 a& |嗯，建议得好，采纳

yooung

回复 guanjun1314 的帖子2 _- V7 j7 ^# ^8 Z6 c
1 G/ A  E8 W: L6 ~0 Q2 G* }
以前也写过一些SOP，我觉得SOP就是把流程细节化，把实际操作文字化，再加些注意事项，套上SOP通用的格式，就可以了。

guanjun1314

回复 yooung 的帖子4 K2 }( T( `0 ~. A- t8 J. c

( r- S5 L6 _$ ?3 X1 y3 a7 d感谢提醒，我要的主要是针对CIK的，流程我们有，但SOP我真没有

yooung

/ Y$ y) M2 w; \1 [; g0 E6 w
' e3 d% ~# o( S6 D* y9 t回复 guanjun1314 的帖子6 c' U& v8 U  i( S0 N

* B/ g+ B7 @0 O, {8 h6 w! s细胞制备操作SOP？SOP要求非常细，不同的细胞的制备SOP肯定不一样，所以你应该说明是什么细胞的制备操作SOP。9 ~' U' k6 E& n, I# ~+ n( c
另附一份脐带间充质细胞的说明书，其中有部分可以用作SOP的内容。0 T! P0 I1 [- b4 ]& x. c