MEF及饲养层的制备（实验记录）

wuxiao101325

好贴，我们最近也在做mef，步骤大同小异，我想请教楼主的是你们做丝裂霉素处理时做过预实验么？
2 ?7 U: z; |3 q+ f9 ^我们准备这样做，还请楼主及各位专家批评指正：
3 C& x) s6 f' c' w% K7 t9 v3 B, }0 f因为不同小鼠品系（我们使用的是BaLbC小鼠）不同，我们认为丝裂霉素的处理时间也应该不一样，所以我们准备等mef长到第二代汇合度达到80~90%时用丝裂霉素分组处理，分为1小时、1.5小时、2小时、2.5小时实验组（时间为处理时间），处理后分别洗净消化并计数，按照50%汇合度的量接种，最后每天观察。. K: |3 J' k) y, ^0 C% `% N# }
预期结果：处理时间不够的肯定能继续繁殖，处理刚刚好的不能增殖，处理过度的话细胞死亡肯定较多（显微镜观察或计数可知），因此最终可以确定这个品系小鼠的合适的处理时间。8 I! u" u6 }; l0 Z
实验结果我会及时跟进和大家讨论的！谢谢！

manybit

是那一种鼠

nculsa747

回复 11# wuxiao101325 [/b我]
* c2 K7 d" n. @5 i6 t9 o' i- T" y) P9 {( r
我们没有做过预实验。你的想法不错，可以试一下。不过你的方案还有待优化，因为预期结果可能并不见得如此明确。2.5小时的处理时间细胞应该不会死亡，因为我看到有人处理3小时。你的时间隔还应拉大0.5，1，2，3，5，8先进行粗筛，这样或许会更好些。结果有可能是这样的：在1-5之间，细胞不能够分裂，细胞状态良好；0-0.5细胞可以增殖；8-~细胞死亡，或是状态很差。另外，MMC一般都用10微克/毫升的浓度，你是不是也做一下其它浓度？呵呵，祝你成功！记得及时告诉大家结果。呵，我的MSN：zhugemengde@163.com

nculsa747

回复 12# manybit
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nculsa747

回复 11# wuxiao101325 $ p  n1 ]4 j1 ?" g
; H, s% u. g5 t0 `$ A! Q# l

  A, P, r& \& g    我刚才问了一下实验室的其它人，他们说两个小时可能是经过摸索过的。具体过程不太清楚。呵呵

bingliangai

非常感谢分享

wangyimei

收获很大，感谢楼主的详细笔记

勺勺

写的真好，学到很多。我做了几次MEF，总是冻存这关做不好，哎，学学大家的经验啊1

勺勺

写的真好，学到很多。我做了几次MEF，总是冻存这关做不好，哎，学学大家的经验啊1

永远的伊凡

谢谢楼主分享