请教一下，大家做转基因的怎么来挑取克隆细胞？

xiangchou812

细胞转染后用药物筛选一下，可以长出来克隆，不知大家怎么挑取的？
7 z* ?; r& b' M! y0 A  f9 I我用过滤纸法，可能是不得法，细胞不往滤纸上粘，还在皿里。! P3 I% H- P* _. L7 j( l) g3 L/ C
欢迎大家讨论，分享自己的经验。

SCNT

最好的方法就是在96孔板或48孔板进行药物筛选，这样很简单就得到单克隆了

xiangchou812

回复 SCNT 的帖子* O5 i0 s: V3 H2 j

! H( e' A/ P# t: e% @# W7 z- M0 ]这样用的板子会不会太多了？

SCNT

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- m8 ~" v# ]4 r8 ~
0 E5 _( I2 q$ m7 G0 u: u虽然用的板子多，但得到的单克隆是相对比较高，也非常容易消化获得单克隆的细胞啊，我们经常用这个方法的

xiangchou812

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6 c$ p1 t6 i3 E# H) N. M# \- b3 o5 Q; q. f) f
应该比较纯，好的谢谢你的建议。* E( \* M& W5 _; N
另外，你们转化后接种时一般密度多少？

SCNT

回复 xiangchou812 的帖子! G, \4 F0 o. I

, Y! N: a; C- E& f- M* U这个没有具体的要求，我们也没有计算过具体密度，也不太现实，肉眼观察，差不多就可以

SCNT

还可以在大皿上筛选，使用微量胰酶消化法收集单克隆细胞

军医

回复 SCNT 的帖子: C- Q) v! p5 S; w
5 W5 X% O/ ]( c& w" B! D8 \) q8 X
这样筛下来，细胞活力会不会没有用96孔板筛的活力好呀，毕竟加药对细胞的活力还是有影响的，我们实验室有时单克隆就扩增不起来了。

xiangchou812

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$ U$ m3 h" H7 Z1 s) _4 x& w. }! i+ E% }  n/ m* W8 x. m
克隆扩增不起来是很正常的，毕竟体细胞在体外的扩增代数有限，所以说，筛克隆不难，但是想要筛到好的克隆就不那么容易了。

生物化学zy

我们实验室,是用自己做的克隆环(就是自己用那个口服液的小瓶的瓶环,用钳子掰下来,干热160度2h灭菌),用镊子夹着放在克隆上,刚好把克隆套上,之后不要移动克隆环,然后滴加少许胰酶消化,最后加含血清培养液终止即可.其实克隆环就是起着将克隆固定的作用.很好用的.