求救哇，G418筛选ES~ - ips专区干细胞之家 - 中国干细胞行业门户第一站



免疫细胞治疗专区	欢迎关注干细胞微信公众号

返回列表

查看: 19193\|回复: 6	go 求救哇，G418筛选ES~ [复制链接]

always_wp

注册会员

Rank: 2

积分: 132
威望: 132
包包: 776

热心会员

楼主

发表于 2011-6-22 11:08 |只看该作者 |倒序浏览 |打印

呃，在向ES中转染个目的基因，随后进行移植，可是现在要用G418进行压力筛选，高手们给我点建议吧，谢谢啊

已有 1 人评分	威望	包包	收起理由
细胞海洋	+ 2	+ 10	欢迎参与讨论

总评分: 威望 + 2 包包 + 10 查看全部评分

回复引用

Rank: 2

积分: 82
威望: 82
包包: 269

沙发

发表于 2011-6-22 12:55 |只看该作者

我上传了一个protocal，你看一下有没有用。
一般转染后要先确定G418的筛选浓度，然后挑选单克隆就可以。

附件: 你需要登录才可以下载或查看附件。没有帐号？注册

已有 1 人评分	威望	包包	收起理由
细胞海洋	+ 3	+ 10	欢迎参与讨论

总评分: 威望 + 3 包包 + 10 查看全部评分

回复引用

举报返回顶部

always_wp

注册会员

Rank: 2

积分: 132
威望: 132
包包: 776

热心会员

藤椅

发表于 2011-6-22 23:19 |只看该作者

回复 lili_19840516 的帖子
. S3 N8 Y; k; g1 w* _9 x7 N/ T
谢谢啦，我先看看啊

回复引用

举报返回顶部

sdjjfangfang

中级会员

Rank: 3 Rank: 3

积分: 524
威望: 524
包包: 1429

优秀会员金话筒

板凳

发表于 2011-6-23 08:38 |只看该作者

转染之前要先筛选G418的作用浓度。设置浓度梯度，大概7天左右的时间，如果让正常的ES全部死亡的浓度，应该是你筛选的合适浓度。筛选的时候要考虑一下MEF的耐受程度哦。我们之前是在feeder free上进行筛选的。

已有 1 人评分	威望	包包	收起理由
细胞海洋	+ 10	+ 20	欢迎参与讨论

总评分: 威望 + 10 包包 + 20 查看全部评分

回复引用

举报返回顶部

always_wp

注册会员

Rank: 2

积分: 132
威望: 132
包包: 776

热心会员

报纸

发表于 2011-6-23 10:13 |只看该作者

回复 sdjjfangfang 的帖子! C& X9 r; X) R- _
' }6 d6 @. F2 |) {
哇呀呀，又见feeder freed~！5 {+ K6 Z: Y! w9 E/ l- D: U' Y
那筛选的浓度范围是在多大的浓度范围内进行筛选的呢，必须要从100-1000ug/ml之内，每间隔100来筛选么。% v" F3 |0 k3 X; [: s# |2 H- C
谢谢啊' N0 v+ X, D& {- C7 h" h. s* F