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大家都是怎么用腺病毒转染干细胞啊 [复制链接]

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包包
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优秀会员 美女研究员

楼主
发表于 2011-12-8 23:14 |只看该作者 |倒序浏览 |打印
我的大体步骤是:8 I' l4 R9 _, f6 h. Y6 y
. j9 }9 ~8 `/ w5 a$ |
用293X细胞做出病毒
) m! u6 w/ Z4 v3 q# [( f' R把病毒溶液直接加到比较小的干细胞克隆上 (2次)
, Y) p3 I4 L0 e/ M0 R2 Y等细胞长满后,在分细胞,打成较小的克隆" w: m% v/ @" b1 p
然后用抗生素筛选阳性克隆, M3 _5 ~% H) f1 m$ m/ c- s
: q6 Z0 Z8 b* L
因为我用的是一个诱导表达系统,当我加入诱导剂后发现只有一小部分(10%)细胞表达了目标基因
7 v5 w/ ~; w* v) E9 _- ?: \* ]: }但是所有的克隆都是抗性筛过的
5 ]6 A1 H% U; T/ F2 |, A' W
' c$ d5 h) @( E所以, 搞不清楚为什么效率很低
$ |9 {) f7 Q9 u  P0 s; H$ B( |8 a5 J
希望高手指点!. K! e! t2 B7 Y3 X% [

. D0 I& O6 G8 q9 }8 v) k2 n
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沙发
发表于 2012-2-12 02:20 |只看该作者
我也想知道,大侠,高手在哪儿啊?

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藤椅
发表于 2014-5-15 09:24 |只看该作者
还没做到这一步,前几步问题就很多

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板凳
发表于 2015-5-25 21:14 |只看该作者
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有10%就知足吧,哈哈,我是转进去,一点迹象都没有呢
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报纸
发表于 2016-3-12 11:17 |只看该作者
感觉是腺病毒滴度不够。腺病毒是瞬时转染,我的理解是转进细胞后目的基因不会随细胞传代,所以病毒数量要足。
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