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我的大体步骤是:8 I' l4 R9 _, f6 h. Y6 y
. j9 }9 ~8 `/ w5 a$ |
用293X细胞做出病毒
) m! u6 w/ Z4 v3 q# [( f' R把病毒溶液直接加到比较小的干细胞克隆上 (2次)
, Y) p3 I4 L0 e/ M0 R2 Y等细胞长满后,在分细胞,打成较小的克隆" w: m% v/ @" b1 p
然后用抗生素筛选阳性克隆, M3 _5 ~% H) f1 m$ m/ c- s
: q6 Z0 Z8 b* L
因为我用的是一个诱导表达系统,当我加入诱导剂后发现只有一小部分(10%)细胞表达了目标基因
7 v5 w/ ~; w* v) E9 _- ?: \* ]: }但是所有的克隆都是抗性筛过的
5 ]6 A1 H% U; T/ F2 |, A' W
' c$ d5 h) @( E所以, 搞不清楚为什么效率很低
$ |9 {) f7 Q9 u P0 s; H$ B( |8 a5 J
希望高手指点!. K! e! t2 B7 Y3 X% [
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