细胞复苏率很低是怎么回事啊？

zhusealin

复苏率低不只是跟冻存有关，跟复苏的方法也有关系，我们复苏的时候前面几毫升培养基是逐滴缓缓加入的，减少渗透压的突然变化对细胞的损伤。冻存如果没有程序降温盒，可以将细胞放进厚壁泡沫盒，封牢，然后放-80

何露

我们都是-4℃20分钟，-20℃20分钟，再转到－80℃。以前用程序降温盒效果不太好。

mirrida

复苏的温度和时间影响很大，37-42度，3Min内溶完，中间不能拿出水面。离心转速2000以内，复苏和冻存一样重要的。

mirrida

复苏的温度和时间影响很大，37-42度，3Min内溶完，中间不能拿出水面。离心转速2000以内，复苏和冻存一样重要的。

准姿梅影

我们实验室一般采用10%FBS+90%DMSO，现用现配，配好后立即加入细胞中，迅速放到程序冷冻盒，-80℃过夜，第二天放到液氮里。解冻时要从液氮迅速转移到37℃水浴，晃动冻存管，确保液体在90s内融化，，随后加5ml含10%FBS细胞培养液，离心后，马上去上清。动作尽量快，减少DMSO对细胞的损伤。如果没有程序冷冻盒，就用多层棉花包裹冻存管，-20℃放2h,-80℃过夜，液氮长期保存。

meiying3061

我一般采用10%FBS+90%DMSO，现用现配，配好后立即加入细胞中，然后用棉花包裹，直接放入-70过夜，第二天放液氮，长期贮存。另外-70也可以短时存放细胞，最好不要超过一个星期。每种细胞的情况也不完全一样，还是要实验中慢慢摸索的。

yyyan126

你用30%FBS+60%完全培养基+10%DMSO 4℃冻存30Min，-20℃冻存2h，-80℃过夜，液氮长期保存，保证你的细胞复苏率高。你冻存方法最大的问题是出在-20℃时间太短，细胞内液体还未完全冻结就放进-80℃，会导致细胞形成的冰晶体过大，复苏时冰晶体融化时会导致细胞破裂。

YYQ6301

回复 yyyan126 的帖子; {/ }" C5 M# [' j0 h

6 o9 @. T7 z- l$ f" r- Q# X( r% Q( p你好  我想问一下你所指的完全培养基是指培养干细胞的培养基吗？利用程序降温盒冻存作用时间也是如此吗？

yyyan126

回复 YYQ6301 的帖子: `" @7 _  a: m, n
# p: R. _! j' a1 w/ h$ \
嗯，对的，其实可以用60%基础培养基+30%血清+10%DMSO，效果一样。加入冻存液的细胞直接放入程序降温盒，直接放入-80℃过夜，过夜后放入液氮中。我之前所说的冻存方法是没有程序降温盒的情况下。

YYQ6301

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3 a$ \5 j4 z# U: A
7 P/ f: c7 ^/ I+ |" v% X谢谢  是不是用90%的FBS冻存，复苏的时候不好融化呢