hiPS复苏后不增殖

573639471

hiPS复苏在灭活的CD-1 MEF上，复苏贴壁率比较高，每天换液，我有下面三个问题：
- t" w% o1 ^7 U" g1、10天后克隆不增长，并且出现不同程度分化（如前四图），大家觉得我feeder还是哪里有问题？7 p; x* V3 }9 }. \- a
2、有很少的比较规则的克隆，如第5、6图红圈所示，大家看看这些克隆挑留可以吗
0 S( f2 X1 ~8 Z2 ~# N. N3、为什么板上总会有些如最后一图红圈所示的杂碎细胞呢？这些是分化的吗

song58

回复 573639471 的帖子) a- [- `$ T6 ^' Z! e0 i5 T

3 Y" u) R# r* j, d& y1、个人感觉第三图里克隆看着还行，尤其是那个小的克隆，值得持续观测。% @7 {, w' f, G  B
2、第六图红圈标注的克隆，如果是我的话我可能就不要了，看着就不太像...+ f% s$ c, M* D" T+ `
3、是分化细胞，感觉有点像倒退回去的EMT过程中的细胞...# y6 _- A  w* T% b# M6 C- Z2 w3 P

4 a6 @. X* h2 D7 }/ w4 Z补充内容 (2012-4-9 17:06):9 U: F' @" c5 }( _. y9 X7 e
第五图，clone1 左上角那两个克隆我觉得应该好好关注。我有一次复苏iPS就是这些看着小的克隆后来长了起来，一直长了2周才扩起来。

dilal

第6张图很像是诱导分化的EB，hiPSC一般一周传代一次，最好不要超过10d，因为处理后的饲养层状态最多维持10天

playboy723

你养的细胞分化了  干嘛不提早传代呢？  养了几天了？

xiaxin1900

检查一下支原体看是否有支原体污染，这个很影响hES的增殖，而且会使细胞分化。

573639471

回复 xiaxin1900 的帖子& Z, K4 J+ b; D

" ?0 b+ X7 R# W, Q. V据说有支原体污染的环境是绝对养不起来的 果真吗？