CRISPR/cas9系统中gRNA的设计

runsong

CRISPR/cas9系统中gRNA怎么设计啊
5 u6 ?$ K; v" s0 W我找的文献说得都不具体
. ]2 D/ a+ c0 ]8 v+ E; I有没有详细一点的步骤？

chips100

参见addgene，说的还算详细。5 K) m) X% r" X" ~: M
另，能惠赠 CRISPR/cas9系统质粒吗

chips100

http://www.addgene.org/CRISPR/5 E# q' P" y# `! Q) u5 C4 h
直接给链接，貌似zhang的比较好

quanri1126

根据zhang的site    http://crispr.genome-engineering.org/  选就行了: q7 R" o! h& u0 c- P% A1 [
exon上的位置 GNNNNNNNNNNNNNNNNNNN NGG  中间20个随机碱基 G+19个N 可以选作一个target  最后的NGG是PAM site ) |. x4 L: B8 L' f3 f8 e1 |& u
再有根据不同的plasmid 可能长度不同 我买的zhang的plasmid 刚开始做 有问题一起讨论吧

chips100

quanri1126：求惠赠质粒

quanri1126

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3 V+ K1 b7 b" d6 e6 g0 V; ~9 E
8 L1 \* H8 I* H$ b/ A7 ~1 q我不在中国，而且从addgene 买也很便宜 运费加上质粒不到1000块钱

cywjswsky

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) i  \- v  s+ x# @6 T: G% T9 i. Q
求详细构建之过程

milanello11

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小桥流水

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* @# A' L1 ^0 T7 [" p
) c# x' s: Y5 I7 B. f; q+ \; ^# e我想问一下，为什么中间是19个碱基呢，如果21个会怎样

小桥流水

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' g- C5 K4 E7 Q  f  k$ b* y# B5 b- @8 y# t) h, @$ K
你好，我想请教一下，在cas9中，设计gRNA引物时,用T7启动子，为什么要求靶标序列满足GGN19GG的条件，，还有为什么中间一定要求是19个碱基，如果不是19个会怎样，，还有如果我的基因里面找不到满足这样条件的序列，那该怎么办呢，跪谢，赐教！谢谢！