小鼠MSC消化问题

wbs1986

之前有很多讨论关于小鼠MSC消化的问题，有的说很难消化，有的很好消化，可能跟小鼠品种，取材部位，所用胰酶种类及消化温度等有关。最近养了小鼠的骨片MSC，传了几代后发现还是不纯，但是都很容易消化（包括原代），胰酶浓度为0.25%，加EDTA。于是想通过控制消化时间来让细胞纯一点，本以为先消化下来的会是比较典型的MSC，但是结果并不如所想那样，先消化下来的细胞在消化时显微镜下看就比较大，从瓶底脱落后都不是圆形。培养几天后发现细胞铺展的厉害，形态很大，类似衰老，如下图$ E# ~1 Z6 a- O" \9 `% I% C

! `" J: t# Z' c6 |$ q消化了1分钟左右，吸去先消化下来的细胞，再用胰酶消化剩余的细胞，培养几天后发现比先消化下来的细胞形态为好，如下图0 z" C) t& f6 S6 q# w. ]" L4 I1 {# R
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请教从这种情况看是否应该取后消化下来的细胞，从图中能否看出还有很多杂细胞。另外最近做了分化实验来鉴定，发现成骨诱导较好，而成脂诱导不出来，不知各位是否碰到过类似情况。

ytumuyangren

你的这个细胞是第几代细胞？看着细有些肥大，状态很不好。我们在做小鼠骨片分离MSC时，最好的能养到第五代的细胞，而且细胞在消化时，还是比较容易消化的，先消化下来的细胞大多都是MSC，剩下不容易消化的细胞消化的时间再长，也不会下来。我曾经试过，将没有消化下来的细胞于培养箱内继续消化，20min后还能看见细胞贴敷于培养瓶底部，所以说先消化下来的细胞就是我们需要的细胞。预祝试验成功。

light_blue

建议做下流式检验。