消化小鼠iPS克隆胰酶的区别的疑问

syacr

19号在论坛上发帖求助，好多热心的朋友帮忙，首先在这个感谢下大家，谢谢。
/ j3 A- n4 |) U5 h/ V接着，说下实验。我也采纳了几位的意见，做了平行实验，具体是这样的。由于之前的一批克隆没有消化开，但是终止消化了，就只能给铺到饲养层上面。但是，我的强迫症就来了。觉得这样一点用没有，开始新的一批还会是一样的结果，根本不解决问题。
: u. l, }2 ^8 n/ b+ k' K. V! a于是我想将已经贴在饲养层上面的没有消化开的克隆重新挑取消化：# i3 j9 E- P& o
1）A，0.25% tryspin/1mM EDTA消化10min；（之前使用的胰酶，购买液体直接分装）2 p& ?# C1 ~9 s  a# c
2）B，0.25% tryspin/1mM EDTA消化5min；（同上）/ _! k* A* M1 w1 i: O+ l8 k$ b& }
3）C，0.25% tryspin/1mM EDTA消化15min；（粉末，配配好过滤分装）
  s$ G% `4 G9 `2 N& X4 ?* u# a4）E，胶原酶IV消化20min! X. ?* p9 I( Q: Z% N9 K: E
结果发现，A、B和E没消化开，C也没有消化完全，但是感觉比其他3组要松散，故又消化了5min，结果终止后，只有C组全散开了，已经重新铺到饲养层上。
& e1 t) `+ D! ]! d8 e' T: \对于克隆需求的胰酶，我真是完全晕了。之前我们实验室一直都在使用粉末的胰酶，但是发现消化效果非常不好，消化一般细胞都很困难，于是购买了新的液体的胰酶。结果现在只有它对克隆有效？？

markllq

胶原酶IV(浓度0.5%)消化20-30min，然后直接吸掉胶原酶（无需终止），再加0.15%胰酶3-5min，拍拍即散，培养基终止。

syacr

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4 q6 j$ a1 f4 n& x' Q' |+ ~. H' h4 G9 @
问一下问什么同时用2种酶消化，这样对细胞是不是会有些损伤。

markllq

回复 syacr 的帖子/ g6 H! L0 d2 i% c3 b& Q/ V# j
+ U! V5 [5 ~& k2 H4 |
不会，两种酶的作用是不同的，消化诱导后期的iPS细胞这是我觉得唯一有效的办法了。

luyue6453

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5 R2 ^4 T" O' C" q# D( j$ }还是第一次听到这样的办法，记下了，有机会试试，谢谢分享