有饲养层的iPSCs 如何做核型分析

Andyhigh

想请教下，有饲养层的iPSCs 如何做核型分析？之前别的细胞或者无饲养层的iPSCs是用秋水仙素处理，针对有饲养层的iPSCs，如何避免饲养层的影响？？？

amanda1988

把细胞消化下来，放在培养箱沉降一个小时，饲养层细胞会先贴下去.

heirrii

学习下

Andyhigh

回复 amanda1988 的帖子$ H- z2 h# t! X. F8 N8 h

! Q' g- F$ j  v, u3 m; s; B  l0 h我们这边的步骤是 “在培养液中加入工作浓度为0.1最/mL的秋水仙素，在37℃ 5% CO2中继续培养3.5~4h，直至细胞核中有圆形发亮的球形为止。” 如果消化下来，单个的iPSCs细胞加秋水仙素或者残留的饲养层 是否会影响后续的试验？
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( n* e0 \: M% j, c" `; r: w$ c% y5 z在含饲养层的iPSCs细胞培养皿中直接加入秋水仙素再消化，与上述先消化再加秋水仙素处理，哪个好呢？

amanda1988

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我做的是加入秋水仙素处理以后，再消化下来。加秋水仙素是让细胞停留在有丝分裂的中期，还是贴壁的克隆状态好吧，处理完以后再消化下来，feeder比较容易贴壁。

Andyhigh

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0 m' j6 t7 r! I, y% C. H) l
好的，决定用你们的方法试试；你们最后是用什么软件分析结果哈？

amanda1988

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自己买的一个Karyo 3.0

lp0030

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+ t1 z+ z; M; Y$ s7 e3 ]' h  @
$ L- t/ s7 a- p' |饲养层细胞不增殖，所以核型分析的时候不会形成染色体的。所以，有无饲养层细胞对你做核型影响都不大，就按常规方法做就可以了。

Andyhigh

回复 lp0030 的帖子0 d& m4 ]% O% L. [7 u; E1 @$ v

& D, a+ I# \# y1 W4 i& G5 F我怎么没想到呢，谢谢哈！