求助：Yamanaka factors

franklinhg

如题，由于现有的质粒都是别人给的，拿回来后也没有验证过。 小弟做小鼠的iPS两次了，结果都没有克隆出现。现在老板催的急，再做不出来的话，估计要直接走人了。 恳请大家帮助小弟一把，能否给予这些质粒一点？十分感谢！

frankieisme

你现在在哪?还有你SNL细胞以及MEF细胞状况如何?MEF细胞最好不要超过第3代.还有病毒包装的情况?比如293细胞\包装质粒\转染方法?

frankieisme

要有耐心,一般需要2周到3周才能见到克隆的.

Yedan

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5 K5 ]. y) G, ]; W: `, \8 s  Y( W2 s: ]+ g* M$ ]( C
在上海么？你是用的经典的pMX质粒做的？参照06年Yamanaka他们那套么？麻烦问详细点

yyshpy

你好像对这方面了解的挺少的，多了解一点吧，也极有可能是你做法的问题，多看看文献，和做过的人交流一下，应该是能做出来的，而且现在改进的方法也很多了，可以看看，借鉴一下

meister

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6 c$ c% @6 z7 Y$ D/ A, `先验证， 再求助。
9 \4 a* x% r0 k$ `  ^  J别人再给你的也也不一定对。; `/ ^$ v* o- ?/ z. a: J  O
验证是必须的

franklinhg

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5 t  Q# b( h( T: R6 p) ]( n* f5 m% L7 r9 u3 y# E* B0 X
是的  就是06年的Yamanaka的那一套系统

franklinhg

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0 [$ L: I! H9 l8 d现在是我和这边做过的人交流  请教了  但是老板不愿意用其他系统的  只用Yamanaka  06年的  不愿意花钱  

franklinhg

回复 meister 的帖子0 h3 w" U: I4 ]" j" H3 q. x

1 s2 q$ D$ J' Z4 ?4 Z这个只要做过分子克隆等的都清楚，最主要是现在这个老板是临床的 然后分子这些根本就是七窍通了六窍-----一窍不通。 但是还要瞎指挥，乱安排。。。结果，什么课题实验在他眼里都是很easy的。而且还不希望自己重复，说是浪费钱。就差把我气的吐血了。

franklinhg

回复 Yedan 的帖子# M" [; \) F- ^) S# H5 ^/ s
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不好意思 我不在上海  现在在深圳。